HPTLC-MS 應用于蛋白質(zhì)的胰蛋白酶水解物的分析研究
近年來，隨著薄層板固定相涂層多樣化的發(fā)展，高效薄層色譜技術被廣泛應用于諸多領域，尤其是 TLC-MS 的聯(lián)用和商業(yè)化設備的日趨成熟，為生物分析研究提供了新的思路。
研究目的
本研究將肌紅蛋白、細胞色素 C、β-酪蛋白和牛血清蛋白 (BSA) 等蛋白質(zhì)的胰蛋白酶分解物中的肽通過高效薄層色譜法進行分離，然后通過與 ESI-MS 偶聯(lián)在薄層板上原位分析，確定序列覆蓋率并與液相檢測結(jié)果進行比較。
研究方法及分析結(jié)果
使用一維 HPTLC 最多分離得到 20 個條帶，獲得非常緊湊的薄層色譜區(qū)，這大約是通過胰蛋白酶消化蛋白質(zhì)樣品獲得的肽的數(shù)量 (例如細胞色素 C 由 104 個氨基酸組成，經(jīng)過胰蛋白酶消化后形成 17 個肽）。
再進一步薄層展開，通過 HPTLC 二維分離，可以增加被分離物質(zhì)的數(shù)量。由下圖可知一維分離色譜可見 11 個分離條帶，二維分離色譜可見 17 個分離斑點。
序列覆蓋率因固定相涂層材料和分離質(zhì)量而異。應用纖維素板的二維分離，序列覆蓋率幾乎與 HPLC / ESI-MS 檢測的序列覆蓋率相當。
由此可見，HPTLC-MS 非常適合分析簡單和中等復雜的肽混合物。HPTLC / MS 聯(lián)用的一個特點是分離和檢測可以各自獨立進行，因此基于薄層開放性色譜的特點可以靈活優(yōu)化分離和衍生化條件，使分離結(jié)果得到更多可能。同時薄層板均為一次性使用，可為各種條件優(yōu)化設計帶來極大的便利。
參考資料?
[1] S. P. Pasilis et al. Anal. Bioanal. Chem. 391 (2008) 317
[2] S. P. Pasilis et al. J. Mass Spectrom. 43 (2008) 1627
從以上例子可見，高效薄層色譜法，憑著高效、快速、操作簡單、結(jié)果準確、靈敏度高和重現(xiàn)性好的優(yōu)勢，不單為樣品檢測帶來創(chuàng)新標準，加上近年來發(fā)展迅速，配合自動化與數(shù)字化技術，更能發(fā)揮前所未有的爆發(fā)力，深受業(yè)界歡迎。
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薄層色譜法的全新數(shù)字時代
講者
唐吉鶴 (力揚企業(yè) – 產(chǎn)品經(jīng)理)
日期
2023 年 5 月 6 日
時間
下午 4:55
分會場 1
色譜基礎和新技術