DBS 干血斑應(yīng)用特集 4: 牛孢疹病毒抗體的檢測(cè)
牛鼻氣管炎及其診斷
牛鼻氣管炎 (bovine rhinotracheitis, IBR) 是一種牛的流行性疾病，患病會(huì)引起牛的產(chǎn)量下降、高額的治療費(fèi)用和貿(mào)易限制，因此會(huì)在世界范圍內(nèi)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
牛孢疹病毒 BoHV-1 是傳染性牛鼻氣管炎 (IBR) 的病原體，而 BoHV-1 抗體則是診斷牛鼻氣管炎的生物標(biāo)記物。對(duì)牛進(jìn)行定期的 BoHV-1 抗體監(jiān)測(cè)可以在病?；疾〕跗谶M(jìn)行個(gè)體識(shí)別與隔離，有效地降低牛鼻氣管炎在牛群中大規(guī)模傳播的風(fēng)險(xiǎn)，因此對(duì)保障畜牧業(yè)收益具有重要的價(jià)值。
干血斑: 方便的血樣采集
目前 BoHV-1 抗體監(jiān)測(cè)采用的是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)，需要由獸醫(yī)抽取牛的靜脈血液，離心分離出血漿，再進(jìn)行檢測(cè)。靜脈取血的取血量大，且過(guò)程比較復(fù)雜，需要獸醫(yī)具有豐富的經(jīng)驗(yàn)。取血過(guò)程中，動(dòng)物往往會(huì)出現(xiàn)抵觸情緒，有時(shí)甚至?xí)艿襟@嚇。
干血斑 (Dried blood spots, DBS) 是一種新型的血液采集和儲(chǔ)存方法。它將微升級(jí)末梢血采集到樣品卡上，干燥后形成斑點(diǎn)。該方法采樣過(guò)程簡(jiǎn)單方便，飼主可自行操作；侵入性小，特別適合對(duì)小型動(dòng)物 / 寵物和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行血樣采集。
相比于液態(tài)血，固態(tài)的干血斑具備更好的穩(wěn)定性和生物安全性，可實(shí)現(xiàn)樣品的常溫運(yùn)輸，更可以以更溫和的條件儲(chǔ)存樣品，構(gòu)建生物樣本庫(kù)。
簡(jiǎn)單血樣采集步驟
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DBS 干血斑應(yīng)用案例:
牛孢疹病毒抗體的檢測(cè)
研究首次將 DBS 技術(shù)應(yīng)用于 BoHV-1 抗體的檢測(cè)中，從技術(shù)上證明了其應(yīng)用可行性。BoHV-1 陽(yáng)性和陰性的干血斑樣本通過(guò)全自動(dòng)干血斑萃取平臺(tái) DBS-MS 500 Hct 直接萃取收集，再進(jìn)行 ELISA 測(cè)試，檢測(cè) BoHV-1 抗體。
與干血斑樣品對(duì)應(yīng)的血漿樣本 (BoHV-1 陽(yáng)性和陰性) 也采用相同的檢測(cè)方式進(jìn)行檢測(cè)，用于對(duì)比干血斑樣本與傳統(tǒng)血漿樣本的異同。另外，此項(xiàng)研究還探討了干血斑的儲(chǔ)存條件與時(shí)間對(duì) BoHV-1 抗體檢測(cè)結(jié)果的影響。
樣本
9 個(gè)陽(yáng)性干血斑樣本、20 個(gè)陰性干血斑樣本及對(duì)等數(shù)量的陽(yáng)性和陰性血漿樣本
檢測(cè)目標(biāo)
BoHV-1 抗體
卡片
Ahlstrom AutoCollectTM?
樣本運(yùn)輸條件
室溫三天、-20°C 四個(gè)月、保存四周 (含 4 個(gè)不同條件: 4°C、室溫、37°C 及一小時(shí)紫外光照后室溫)
提取方法
Epitope ELISA kit 緩沖液直接提取
檢測(cè)方法
ELISA、IDEXX IBR gB X3 Ab Test kit
結(jié)果
干血斑樣本的檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)血漿樣本結(jié)果完全一致。
另外，干血斑樣本在室溫下保存 3 天或在 -20°C 保存 4 個(gè)月，都能得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，因此其高穩(wěn)定性可以允許干血斑樣本的室溫運(yùn)輸及長(zhǎng)期保存，特別適合用于相關(guān)疾病的大規(guī)模篩查。
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從左至右的五個(gè)條件分別為室溫保存 3 天的陽(yáng)性干血斑、-20°C 保存 4 個(gè)月的陽(yáng)性干血斑樣本、陽(yáng)性血漿樣本、陰性干血斑樣本和陰性血漿樣本?？贵w效價(jià)說(shuō)明: >55% 認(rèn)定為陽(yáng)性，<45% 認(rèn)定為陰性，45% – 55% 之間為懷疑樣本。
參考文獻(xiàn):
Lechmann, J.; Gehrig, O.; Luginbühl, M.; Fraefel, C.; Gaugler, S.?Fully automated dried blood spot sample handling and extraction for BoHV-1 antibody testing by ELISA. J. Virol. Methods 2022, 310, 114626.
配合干血斑加快進(jìn)行生物標(biāo)記物的研究，力揚(yáng)推出 CAMAG 全自動(dòng)干血斑萃取系統(tǒng) DBS-MS 500，從自動(dòng)化方向?qū)鹘y(tǒng)干血斑技術(shù)進(jìn)行的一次全面升級(jí)，可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)、快速、無(wú)人值守的干血斑樣品制備，并可結(jié)合質(zhì)譜、PCR、NGS 測(cè)序及 ELISA 等檢測(cè)技術(shù)，應(yīng)用于以下領(lǐng)域：
健康生物標(biāo)記物檢測(cè)
治療藥物監(jiān)測(cè)
基因組檢測(cè)
感染檢測(cè)
生物樣本庫(kù)
藥物的臨床前試驗(yàn)
食品安全
