HPTLC 通用混標(biāo) (UHM): 高效薄層色譜系統(tǒng)適用性測(cè)試 (SST) 新思路
“在 HPTLC 系統(tǒng)中，每張板都代表一個(gè)新的分析體系。每次進(jìn)行分析操作當(dāng)天，在每個(gè)板上都應(yīng)執(zhí)行 SST，以驗(yàn)證其是否符合實(shí)驗(yàn)條件要求。SST 通常僅適用于包含預(yù)設(shè)限值在內(nèi)的單個(gè)方法。如果 SST 失敗，則樣品檢測(cè)數(shù)據(jù)無(wú)效，無(wú)法進(jìn)行評(píng)估。”?
在高效薄層色譜 (HPTLC) 中，應(yīng)用合適的系統(tǒng)適用性測(cè)試 (SST) 在每個(gè)薄層板上對(duì)分析系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證非常重要，是數(shù)據(jù)有效性的前提，一般是選擇幾個(gè)具有特定分析方法的化學(xué)對(duì)照物質(zhì)作為參考。但目前常用的 SST 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)具有一定的局限性，列舉《美國(guó)藥典》和《歐洲藥典》中關(guān)于 SST 的描述內(nèi)容可見(jiàn)下表：
SST 新思路
HPTLC 通用混標(biāo)
針對(duì)上文列出的局限性，UHM 應(yīng)運(yùn)而生，可用于在常規(guī)分析中驗(yàn)證 HPTLC 結(jié)果，實(shí)現(xiàn)對(duì) HPTLC 色譜圖的整個(gè)?RF?范圍進(jìn)行驗(yàn)證。
什么是 UHM ？
UHM, the Universal HPTLC Mix，即高效薄層色譜通用混標(biāo)，由 8 種不同性質(zhì)的化合物組成，廣泛適用于各種 HPTLC 方法的 SST 測(cè)試。
HPTLC 通用混標(biāo) (UHM) 的開(kāi)發(fā)
01. 物質(zhì)的選擇
選擇的物質(zhì)最好具有安全、穩(wěn)定、無(wú)需衍生化即可檢測(cè)、易于獲得且價(jià)格低廉等特點(diǎn)。據(jù)此，實(shí)驗(yàn)人員從數(shù)以千計(jì)的物質(zhì)列表中，選擇了 24 種化合物。
針對(duì)這 24 種化合物在 HPTLC 板上的色譜行為進(jìn)行研究，分別用 20 種不同展開(kāi)劑進(jìn)行洗脫，涵蓋盡量廣泛的極性和選擇性，最終從中選擇了 8 種化合物：鳥(niǎo)苷、舒利苯酮、胸苷、撲熱息痛、鄰苯二甲酰亞胺、氫芴、噻噸酮和 2-苯并三唑四甲基丁基苯酚。?
02. 評(píng)估響應(yīng)特性
相對(duì)濕度對(duì)每種物質(zhì)的選擇性有不同的影響。當(dāng)板的活性偏離預(yù)期的相對(duì)濕度 0 – 5%、33%、75% 或 100% 時(shí)，UHM 的響應(yīng)特性可以清楚地檢測(cè)出這些偏離。
對(duì)甲苯-乙酸乙酯 90:10 (V/V) 的展開(kāi)劑組成施加每種組分溶劑 ±10% 的變化，用 UHM 獲得的 HPTLC 指紋圖譜有顯著反應(yīng)。
針對(duì)相同的展開(kāi)劑進(jìn)行不同飽和參數(shù)設(shè)置的考察（不飽和、部分飽和和充分飽和)。結(jié)果表明，部分飽和?RF?值相對(duì)增加，而完全飽和?RF?值相對(duì)降低，UHM 可以檢測(cè)飽和操作的一般影響。?
03. 評(píng)估 UHM 性能
分別在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間進(jìn)行檢測(cè)，使用 3 種展開(kāi)劑并得出 ΔRF，評(píng)估 UHM 性能。
在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)試驗(yàn)中，ΔRF?為 0.029; 實(shí)驗(yàn)室間試驗(yàn)為 0.040。
04.?評(píng)估不同類型的硅膠薄層板
在色譜系統(tǒng)中薄層板的材料是一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)。由于硅膠的規(guī)格不同，例如不同的粘合劑或熒光指示劑的存在，不同的薄層板可能會(huì)有不同的選擇性。?
使用 UHM 評(píng)估了 6 種不同類型的涂敷型硅膠薄層板，使用相同的展開(kāi)劑，乙酸乙酯-甲酸-乙酸-水 100:11:11:26 (V/V)。
UHM 與現(xiàn)行 SST 比較
使用 UHM 和現(xiàn)行的 SST 進(jìn)行精油標(biāo)準(zhǔn)鑒別。
在原有方法中乙酸異丁香酚 [1a] 和異丁香酚 [1b] 被定義為 SST。作為特定標(biāo)記物，使用的是芳樟醇和乙酸芳樟酯，或冰片和乙酸冰片酯。在這個(gè)例子中，還測(cè)試了 3 種精油：薄荷油、薰衣草油和肉豆蔻油。
針對(duì) UHM 和當(dāng)前 SST 的每個(gè)成分，計(jì)算平均?RF?值及其預(yù)測(cè)區(qū)間。下圖數(shù)據(jù)表明，UHM 成分的預(yù)測(cè)區(qū)間與原始 SST 的預(yù)測(cè)區(qū)間在同一范圍內(nèi)。
總結(jié)
HPTLC 通用混標(biāo) (UHM) 是當(dāng)前 SST 的一個(gè)很好的替代方法。
8 種不同極性、不同化學(xué)類別組分的混合物價(jià)格低廉、穩(wěn)定，對(duì)驗(yàn)證色譜系統(tǒng)的變化具有良好的響應(yīng)性。
與當(dāng)前的 SST 相比，UHM 的成分顯示出與已建立的 SST 的物質(zhì)和特定標(biāo)記物具有相似的預(yù)測(cè)區(qū)間。
UHM 可以檢測(cè)展開(kāi)劑梯度的變化或飽和效應(yīng)，而許多已建立的 SST 通常只能描述有限的?RF?范圍。
會(huì)議內(nèi)容重溫
由此可見(jiàn)，高效薄層色譜越來(lái)越受實(shí)驗(yàn)人員的關(guān)注，原因不單在其快速、直觀、自由衍生的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，而且適用于復(fù)雜成分樣品的分離及檢測(cè)。從以上案例中，通過(guò)通用混標(biāo)的應(yīng)用，簡(jiǎn)化 SST 方法開(kāi)發(fā)周期，有效保證 HPTLC 在常規(guī)分析檢測(cè)中的數(shù)據(jù)重現(xiàn)性、有效性和可靠性。
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